凝胶渗透色谱(Gel PermeationChromatography,简称GPC)是一种用于测定高分子物质分子量及其分布的液相色谱技术。
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以下是关于GPC分子量检测的详细说明,包括其原理、应用及方法。
一、GPC检测原理
GPC,又称体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography,SEC)或凝胶过滤色谱(GelFiltrationChromatography,GFC),其基本原理是利用多孔性凝胶作为固定相,通过不同孔径将高分子溶液中的分子按体积大小进行分离。
分离机制:
大分子排阻:较大的分子(体积大于凝胶孔隙)被排除在粒子的小孔之外,只能从粒子间的间隙通过,速率较快。
小分子渗透:较小的分子可以进入粒子中的小孔,通过的速率较慢。
中等体积分子:介于两者之间,部分渗入较大的孔隙中,但受到较小孔隙的排阻。
检测过程:
高分子溶液通过填充有微孔凝胶的色谱柱,按照分子大小进行分离。
柱子内填装的凝胶可为有机或无机材料,具有各种大小不同的孔洞和通道。
通过检测器(如示差折光仪)检测不同分子量的分子在色谱柱中的流出时间,从而得到分子量分布的色谱图。
二、GPC检测方法
传统GPC:
使用折光检测器,通过检测溶液的折射率变化来判断高分子物质的存在和浓度。
通过建立标准曲线,根据流出时间确定分子量。
现代GPC:
可使用多种检测器,如紫外-可见光检测器(UV)、光散射检测器(LS)等,以提高检测的准确性和灵敏度。
根据不同应用需求,选择合适的流动相和测试条件。
三、GPC应用
聚合物分子量测定:
GPC可测定聚合物的相对分子质量及其分布,对检测相对分子量分布(多分散性指数)对聚合物的性质有重要意义。
高分子材料分析:
广泛应用于高分子材料的表征,如分子量分布、支化度等。
生物分子分析:
适用于生物大分子(如蛋白质、核酸等)的分析。